1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一．本课题的意义日本医蛭（Hirudo nipponica）隶属于环节动物门蛭纲无吻蛭目医蛭属[1]，是《中国药典》（2015年版）收载的唯一吸食动物血液的水蛭药材种类，其体内含有世界上最强天然抗凝血酶物质水蛭素，因此具有极强的抗凝血酶活性和抗血小板聚集作用[2]，是一种极具发展潜力的药用动物。
通过对日本医蛭抗凝相关基因时空表达的研究，分析抗凝基因的表达规律，为日本医蛭未来的研究提供一定的理论基础。
二．国内外研究概况水蛭素杨潼[3]等采用离子交换柱层析与凝胶过滤柱层析的方法对从我国产的日本医蛭活体中提取出的唾液腺分泌物进行分离和纯化,获得了较纯净的水蛭素，测定结果表明：日本医蛭唾液腺分泌物提取液中水蛭素含量为4 Uml-1；纯化总得率为15 %；纯化后的产物比活力为6708 Umg-1蛋白。
2. 研究的基本内容和问题
一．研究的目标1、分析日本医蛭抗凝相关基因的时空表达规律。
2、揭示影响日本医蛭摄食的关键抗凝基因。
二．研究的内容1、收集不同摄食时期日本医蛭的唾液腺。
3. 研究的方法与方案
一．研究方法1、cDNA合成cDNA的合成使用PrimeScript RT TM reagent Kit试剂盒（适用于SV Total RNA Isolation System提取的RNA），反应体系如下：5PrimeScript Buffer2.0 μLPrimeScript RT Enzyme Mix 1 0.5 μLOligo dT Primer0.5 μLRandom 6 mers 0.5 μLTotal RNA<500 ng="" rnase="" free="" dh2o="" up="" to="" 10="" μl="" 反应体系可按需求相应放大，反转录反应条件：37℃反转录反应15="" min，85℃反转录酶的失活反应5="" sec。
cdna样品保存于-80℃冰箱备用。
="" 2、qpcr体系="" sybr="" primescript="" tm="" rt-pcr="" kit="" ii="" 购自takara公司。
4. 研究创新点
特色或创新之处目前，国际上对蛭纲动物的研究主要集中于欧洲医蛭Hirudo medicinalis Linnaeus、宽体金线蛭Whitmania pigra Whitman和菲牛蛭 Poecilobdella manillensis Lesson，对日本医蛭的研究却十分匮乏。
该课题首次研究了日本医蛭抗凝相关基因在不同吸血时期的差异表达，分析并总结了其抗凝相关基因表达的一般规律，旨在为日本医蛭开发利用提供理论依据及参考。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展1、2017年4月- 2017年5月： 课题前期准备，熟悉所涉及的实验方法，查阅相关文献，准备开题。
2、2017年6月- 2017年8月：分别提取各时期、各组织的RNA。
3、2017年8月- 2017年9月：将所提RNA反转录得到cDNA。
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