热休克蛋白干预脂肪沉积的作用研究开题报告

 2023-01-08 10:33:46

1. 研究目的与意义

我们前期的研究发现,热休克蛋白具有抗动脉粥样硬化的作用,但这种作用是否与调节脂质代谢有关尚不清楚。本课题拟通过多种方法研究热休克蛋白对模式生物线虫的脂肪沉积的影响,并观察线虫摄入热休克蛋白后的生理特征的变化。以此为后期的抗动脉粥样硬化的深入研究奠定基础。

2. 文献综述

热休克蛋白干预脂肪沉积的作用研究

吴 鹏

(南京中医药大学,11中药一班 南京 210023)

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3. 设计方案和技术路线

研究方案

1.常规方法进行线虫的同步化培养

2.摸索影响线虫脂质沉积的热休克蛋白的剂量范围

3.不同染色方法(油红、苏丹黑、尼罗红)比较热休克蛋白对线虫脂质沉积的影响

染色剂

染色结果

观察条件

油红O

脂肪被染成鲜红色,细胞核染成深蓝色,其他组织被染成淡蓝色

光学显微镜

苏丹黑B

脂肪被染成黑色,对中性脂肪,尤其对磷脂的亲和力更具有特异性,不仅能显示大的脂肪滴,而且可显示微细结构中的隐性脂类

光学显微镜

尼罗红

在激发波长543nm的激发下,显示强烈桔黄色荧光(散发波长598nm),同时在紫外光的照射下显示红色

荧光显微镜

技术路线

1.线虫及其食物的培养

1.1培养大肠杆菌OP50

1.2同步化培养线虫

2.热休克蛋白培养基的制备

3.热休克蛋白对线虫脂质沉积的影响

3.1不同浓度热休克蛋白对线虫脂质沉积的影响

3.2染色法分析热休克蛋白对线虫脂质沉积的影响

3.3热休克蛋白干预脂质沉积的途径分析

4. 工作计划

2022.12-2022.1 文献调研及实验准备

2022.2-2022.3 线虫的同步化培养

2022.3-2022.4 热休克蛋白对线虫脂质沉积的影响

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5. 难点与创新点

线虫是一种经典的模式生物,其遗传背景清楚、个体结构简单、生活史短、基因组测序已完成通过比较基因组学得出,线虫的蛋白质组序列中至少有40%的人类同源基因。因此,线虫被广泛应用于遗传与发育生物学、行为与神经生物学、衰老与寿命、人类遗传性疾病、药物筛选、环境生物学等研究领域。目前,线虫已被广泛应用于生理和毒理学研究中。

热休克蛋白是否具有调节脂肪代谢的作用尚不清楚。本课题探索性的研究热休克蛋白对线虫脂质代谢的影响,为其后续研究奠定基础。同时探索一种简便、快速、高效发现调节脂质代谢的药物的途径和方法,具有良好的实践价值。
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