1. 研究目的与意义
内容：①毕赤酵母发酵过程研究②毕赤酵母发酵过程中降解的产生③优化酵母粉、蛋白胨补料浓度对降解影响④优化补料的流加速率及流加时机意义：巴斯德毕赤酵母由于在其细胞的过氧化物酶体中含有甲醇代谢途径所必需的酶，如醇氧化酶、过氧化氢酶、二羟丙酮合成酶等，所以是甲醇营养型中的一类能够利用甲醇作为唯一碳源和能源的酵母菌。
毕赤酵母表达系统在蛋白质表达方面具有许多的优势，如具有外源基因遗传稳定、细胞生长速率快、产物表达效率高，能够有效的转录和翻译，准确的完成糖基化、磷酸化、二硫键的形成等翻译后加工修饰。
但毕赤酵母在发酵过程中会产生降解，对降解的研究大部分学者针对温度、PH基础工艺参数，而一小部分文献表明通过优化YP补料工艺，较好的抑制了发酵过程中的降解，而我们进一步针对不同的YP补料浓度以及流加方式进行了优化，对于抑制降解有更有利的作用。
2. 文献综述
毕赤酵母表达目的蛋白过程中降解的研究进展摘要：巴斯德毕赤酵母表达系统是近几十年发展起来的真核表达系统，是目前最为成功、应用最广的系统之一。
与现有的其他表达系统相比，巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分泌、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面具有明显优势。
但是在表达目的蛋白的过程中蛋白质降解是一个主要问题，多数研究者们研究了不同的PH和温度等工艺对表达过程中蛋白稳定性的影响，提出了一些抑制蛋白质降解的方法。
3. 设计方案和技术路线
1、了解毕赤酵母表达目的蛋白的发酵过程 毕赤酵母发酵有两个阶段：甘油批次阶段：通常以甘油为碳源，以累积菌体为目的，使菌体浓度增加到一定水平并保持活力。
进行批式发酵直到甘油被完全消耗（18-24h），标志是DO突然升高至50%以上，甘油完全消耗的时间会随着初式发酵液密度而变化。
甲醇诱导阶段：当甘油消耗完毕后，流加甲醇菌体以甲醇为碳源开始表达外源蛋白。
4. 工作计划
第一阶段：2022年1月至2月：文献综述思路形成，实验方案制定；第二阶段：2022年3月上旬：初步实验，实验条件选择；第三阶段：2022年3月下旬至5月：进行实验研究；第四阶段：2022年5月至6月：整理数据，撰写论文。
5. 难点与创新点
在优化了基础工艺参数PH和温度后，采用YP补料流加抑制降解的产生，优化了YP补料工艺，对抑制降解有较好效果。
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