表达传染性法氏囊病毒VP2和法氏囊素三肽嵌合基因重组火鸡疱疹病毒的构建开题报告-论文开题网

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD) 是影响家禽生产最常见的免疫抑制性疾病之一，是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV) 引起的鸡免疫抑制性传染病，具有急性、高度接触传染等特点，能在鸡群中迅速传播。

因其产生的免疫抑制常伴发新城疫（ND）、马立克氏病（MD）等疫苗接种的免疫失败，导致这些疾病的发病率和病死率很高，给养鸡业造成极大危害[1-3]。

IBDV属双RNA病毒科，基因组包括大（A）小（B）两个片段，有五种病毒蛋白：VP1、VP2、VP3、VP4和VP5。

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研究目标：构建了pec启动子表达IBDV VP2和法氏囊素三肽嵌合蛋白的火鸡疱疹病毒转移载体，为研制以HVT 为载体的鸡传染性法氏囊病(IBD) 的高效活疫苗提供实验依据。

研究内容：（1）BS10-VP2 基因设计、克隆及表达盒的构建（2）重组火鸡疱疹病毒转移载的构建解决的关键问题：重组BS10-VP2基因火鸡疱疹病毒转移载的构建

研究方法及实验方案：（1）BS10-VP2 基因设计、克隆及表达盒的构建根据注册的 IBDV VP2 序列设计(GenBank NO.AF362747)设计引物，用RT-PCR方法从AH1病毒RNA中扩增完整的IBDV VP2基因。

引物序列如下：VP2-F1：5-ATGGCG AACCTGCAAGATCAAAC-3 ；VP2-R1: 5-GGGAAGCTTCTACTACCTCCTTATGGC CCGGATTATGTCTTTG-3。

选用编码赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)和甘氨酸(Gly)的常用密码子按顺序排列成BS基因：5'-AAGCATGGC-3。

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（1）BS10-VP2 基因设计选用编码赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)和甘氨酸(Gly)的常用密码子按顺序排列成BS基因：5'-AAGCATGGC-3。

设计并合成基因片段BS10-F1、BS10-R1。

以自身为模板，通过退火使其复性成双链，其PCR产物为编码10个BS三肽的cDNA片段，命名为BS10。

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2016年9月-2016年9月中旬：BS10-VP2 基因设计、克隆及表达盒的构建2016年9月下半月-2016年10月中旬：重组火鸡疱疹病毒转移载的构建

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