1. 研究目的与意义
一、研究内容： 1、DM-KG对肝癌SMMC-7721、SMMC-7721/DOX乳酸生成的影响 2、DM-KG对肝癌细胞SMMC-7721、SMMC-7721/DOX细胞ATP水平的影响。
3、DM-KG对肝癌SMMC-7721、SMMC-7721/DOX细胞脯氨酰羟化酶、HIF表达及酶活性的影响 4、DM-KG对肝癌细胞SMMC-7721、SMMC-7721/DOX细胞周期、细胞凋亡的影响。
二、研究意义能量代谢异常是肿瘤细胞的重要生物学特征，有氧糖酵解普遍存在于肿瘤细胞中，氧化磷酸化水平相对复杂，具有显著异质性及可塑性。
2. 文献综述
肿瘤细胞中的能量代谢研究进展摘 要：肿瘤细胞中糖酵解途径的增强主要是由于氧化磷酸化功能不可逆转的损伤所导致的（Warburg效应），不同类型的肿瘤细胞中导致氧化磷酸化代谢途径损伤的机制以及主要依赖的能量代谢途径（糖酵解和氧化磷酸化）各不相同，应通过大量实验研究来进一步评价不同类型肿瘤细胞中线粒体的氧化磷酸化能力。
在本文中综述了关于各种不同类型肿瘤细胞中导致氧化磷酸化代谢途径受损的可能机制的研究新进展。
关键词：能量代谢；糖降解；氧化磷酸化；肿瘤细胞；线粒体Advances in energy metabolism in tumor cellsAbstract：Enhanced glycolysis pathway in tumor cells is mainly due to the irreversible damage caused by oxidative phosphorylation function (Warburg effect), different types of tumor cells resulting in oxidative phosphorylation of metabolic pathways damage mechanism, and mainly depends on the energy metabolism pathways (glycolysis and oxidative phosphorylation) each are not identical, should further evaluation by a large number of experimental studies of different types of cancer cells mitochondrial oxidative phosphorylation. Were reviewed in this article about a variety of different types of tumor cells damaged cause oxidative phosphorylation metabolic pathway in the new development of research on the possible mechanism. Key words: Energy metabolism; Glycolysis; Oxidative phosphorylation. The tumor cells; The mitochondria1.肿瘤细胞中的糖酵解与能量代谢代谢研究 早在 1927年，Warburg 等 [1-2]观察到肿瘤细胞，正常细胞代谢更多的糖并转化为乳酸。
3. 设计方案和技术路线
一、实验方案1.SMMC-7721/DOX、SMMC-7721细胞的培养2.采用MTT实验方法观察不同浓度DM-KG对于对SMMC-7721、SMMC-7721/DOX细胞生长的影响，筛选合适的给药浓度，确定给药方案。
3. 乳酸检测利用乳酸检测试剂盒，检测乳酸含量的差异4.ATP检测实验结束时各组细胞加入200 μLATP裂解液，裂解细胞，4 ℃低温下，12000 r/min离心5 min，取上清，按BCA蛋白浓度测定试剂盒操作，酶标仪测定562 nm，根据标准曲线计算样品蛋白浓度；按增强型ATP检测试剂盒操作，微孔板发光检测仪测定RLU值，根据标准曲线计算样品ATP浓度，将ATP的浓度处理成nmol/mg蛋白的形式以消除制备样品时由于蛋白量的差异而造成的误差。
5.免疫荧光法检测HIF蛋白表达种板加药后，通透化处理: 将滴片取出室温恢复 10min， PBS 洗涤细胞3次，0. 1%Tnton-X100 室温孵育 15 min；封闭:将滴片浸入含有 5% FBS 的 PBS 溶液中,37 ℃ 30 min； 滴加一抗，4℃ 过夜； 滴加 FITC 标记 二抗，37℃1 h，PBS 洗 5min* 3 次，此步之后需注 意避光操作； 染核：DAPI染核，37℃5 min, 95%乙 醇洗1遍，PBS 洗3遍; 将淬灭剂滴1 滴至载玻片，盖玻片盖其上，激光共聚焦显微镜下观察。
4. 工作计划
3月1日-3月11日文献查阅，资料整理，设计课题3月11日-5月31日购买药品，细胞培养，开展实验研究6月1日-6月10日整理实验材料，分析实验结果，总结论文
5. 难点与创新点
目前，尚未见DM-KG影响肝癌细胞糖酵解、诱导细胞凋亡的机制研究报道，本课题拟利用α-KG抑制剂氨基氧乙酸(AOAA)作对照，研究DM-KG对肝癌SMMC-7721、SMMC-7721/DOX细胞糖酵解水平的影响，及其与诱导凋亡之间的相关性，从糖酵解异常角度研究DM-KG诱导细胞凋亡的机制，为开发逆转肿瘤MDR药物研究提供新的思路，具有重要的理论意义与应用价值。
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