冰片对川芎注射液中洋川芎内酯I不同脑区脑内药动学的影响开题报告

1 实验目的：研究冰片对川芎注射液中洋川芎内酯i不同脑区脑内药动学影响

2.实验材料：

2.1实验动物：SD雄性大鼠80只，分20小组，每组4只。

2.2实验药品与试剂：

（1）10%川芎注射液：批号170704，厂家：上海长海医院。

（2）冰片的配制：取冰片2.0g，磨碎。加丙二醇，溶解，加聚乙二醇400，加吐温-80，加水至15.6ml，ig，10mL/kg。冰片，购于北京同仁堂药店，北京三和药业有限公司，批号77820501。

（3）洋川芎内酯i对照品，批号：140827，厂家：成都克洛玛生物科技有限公司；洋川芎内酯A对照品，批号：140827，厂家：成都克洛玛生物科技有限公司；内标物：多索茶碱，批号：100625-201202，厂家：国家药品标准物质。

（4）甲醇，色谱纯；水，超纯水。

2.3实验仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，G1379A在线脱气机，G1311A四元梯度泵，G1313A自动进样器，G1314AVWD可变波长紫外检测器，Chemstation色谱工作站；离心机，型号：TG-16W 厂家：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；匀浆机，型号：XHF-D厂家：宁波新芝生物科技有限公司；电子分析天平，型号：FA1004，厂家：浙江力辰仪器科技有限公司

3.实验方法

3.1色谱条件

色谱柱：Hedera ODS-3 C18（250mm4.6mm，5μm）；流动相：甲醇:水＝70:30；柱温=30C；检测波长=280nm；流动相流速=1.0ml/min；进样阀定量为5ul。

3.2样本预处理： 取血浆0.5ml，加入内标溶液（10μg/mL的多索茶碱甲醇溶液）0.5mL，涡流混匀1min，离心16000rpm，10min，取上清进样。取脑组织，按照脑重(g)/NS体积(ml)= 1/10的比例进行匀浆，取0.4mL匀浆液，加入400μg/mL的多索茶碱甲醇溶液10μL，离心2500rpm，10min，取上清0.2mL，再加入0.2mL甲醇，涡流混匀1min，离心16000rpm，10min，取上清进样。

3.3方法学考查

3.3.1专属性试验：分别取大鼠空白血浆和各脑区脑组织匀浆，加入洋川芎内酯I标准品的空白血浆和各脑区组织匀浆，以及大鼠注射川芎注射液后获取的血浆、脑匀浆样品，按3.2项下操作，观察内源性成分对洋川芎内酯I的干扰情况。

3.3.2 标准曲线的绘制

取空白大鼠血浆0.5mL，加入洋川芎内酯I和IS标准品，配制成含有一系列浓度洋川芎内酯I的血浆样品（含IS），按照上述方法中样本预处理项下操作。以血浆中洋川芎内酯I浓度为横坐标（x），洋川芎内酯I和IS的峰面积之比为纵坐标（y），绘制标准曲线，确定线性范围。

取空白大鼠各脑区组织，匀浆后，加入洋川芎内酯I和IS标准品，配制成含有一系列浓度洋川芎内酯I的各脑区组织样品（IS），按照上述方法中样本预处理项下操作。以脑组织中洋川芎内酯I浓度为横坐标（x），洋川芎内酯I和IS的峰面积之比为纵坐标（y），绘制标准曲线，确定线性范围。

3.3.4提取回收率、精密度、准确度和稳定性考察

利用空白血浆、空白脑组织分别制备三个浓度的QC样本。进行提取回收率、精密度、准确度和稳定性考察。

3.4 药动学分析

取SD大鼠80只，按照有无采用冰片干预或冰片的不同剂量，将大鼠分为2大组，每组40只（每个时间点4只）。即：川芎注射液（CX）组和冰片 川芎注射液（BP CX）组。BP CX组大鼠灌胃冰片（0.16g/kg）15min后，尾静脉注射川芎注射液1.0 g/kg。CX组只注射川芎注射液，不给冰片处理。控制注射速度为0.1ml/s。各组动物给予药后于0、2、5、8、15、30、45、60、90、120 min眼眶取血1.5 ml于肝素化离心管中，全血离心取血浆。同时处死大鼠，取脑，剔除脑部大血管，NS淋洗，滤纸吸干。分离皮层、海马、下丘脑和纹状体，各脑区组织称重。血浆和脑样本按照3.2项进行预处理后备用进样。绘制浓度-时间曲线，采用DAS 3. 0软件以非房室模型统计分析洋川芎内酯I的药代动力学参数。

同时按照下列公式计算各组血浆和脑组织的相对生物利用度（F）以及冰片的药物靶向指数（DTI）。

F= AUC_干预组/AUC_空白组100%

DTI=[AUC_{干预组-脑}/AUC_{干预组-血}]/[AUC_{空白组-脑}/AUC_{空白组-血}]