1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
长期以来化学农药一直是植物病害防治的主要方式,它对农业生产上防治病虫害起到了十分重要的作用,但长期不合理使用化学农药产生了诸多问题。
因此开发对人类和环境友好、并具良好防治效果的新的植物病虫害防治策略尤为重要[1-2]。
在植物病害生物防治的探索过程中,科研工作者利用不同的有益微生物,在植物病害防治上做了大量的研究工作[3]。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容本项目以实验室分离的具有较好的抑菌活性芽孢杆菌M4H4和M4H8 这2个菌株的为研究对象。
采用16s rDNA和gyrB基因序列分析对上述菌株进行鉴定,并对其产生的杀虫和抗菌物质进行分析,及编码基因进行克隆和表达来分析鉴定芽孢杆菌的种类。
并对芽孢杆菌产生的杀虫和抗菌物质进行鉴定,通过温室和实验室研究杀虫和抗菌物质的杀虫和抗菌功能,为菌株的杀虫抗病利用提供基础。
3. 研究的方法与方案
研究方法本项将采用生理学、生物学实验;PCR、16S rDNA序列分析、cry基因克隆技术;利用电泳分析的方法;采用温室和实验室研究等方法来实验研究芽孢杆菌杀虫和抗菌功能。
技术路线和实验方案1. 芽孢杆菌基因种类的鉴定。
1) 菌株活化2) 菌株发酵3) 菌株DNA提取4) 引物设计,进行PCR扩增 5) 连T载体6) 电泳7) 培养基过夜培养菌株8) 测序2.杀虫和抗菌物质的提取。
4. 研究创新点
芽孢杆菌属(Bacillus spp.)为革兰氏阳性杆状细菌,芽孢杆菌是一类重要的生防菌,脂肽化合物是芽孢杆菌产生的最主要抑菌化合物,主要包括伊枯草菌素(Iturin)、表面活性素(Surfactin)和泛革素(Fengycin)三大类,在植物病害防治过程中发挥着重要的作用。
其也含有杀虫活性物质伴胞晶体蛋白。
本研究同时研究其杀虫和抑菌的作用,为了解其生物学效应机制提供一条可行的途径,为研究芽孢杆菌的杀虫和抑菌的作用提供理论基础,也为提高农业和林业上防治害虫提供可靠的理论依据。
5. 研究计划与进展
2014.08~2014.11(1)对菌株进行活化和培养基培养.(2)制备大肠杆菌感受态细胞,进行连T载体.(3)送去公司测序对实验的菌株进行鉴定及提取杀虫和抑菌物质.2014.11~2015.01(1)提取出蜡样芽孢杆菌的杀虫和抑菌物质.(2)进行抑菌实验.(3)进行杀虫实验.2015.01~2015.03 整理及总结研究成果,完成论文撰写.
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