1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
羧酸酯酶(carboxylesterases, CXEs, E.C.3.1.1.2)属于α/β水解酶折叠超家族[1],可以水解短链脂肪酸酯键,广泛分布于动物、植物和微生物中。
该家族蛋白结构中包含8个β折叠,与α螺旋以及无规则环组成一个保守的核心结构。
CXEs酶类的主要特征是三个起催化作用的残基,分别是GXSXG保守序列中的丝氨酸,酸性氨基酸(天冬氨酸或谷氨酸)和组氨酸[1-2]。
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2. 研究的基本内容和问题
1。
研究的目标和内容(1)油菜BnCXE的基因克隆;(2)BnCXE基因在油菜的时空表达 模式分析。
2.拟解决的关键问题:本课题旨在通过对油菜BnCXE的基因表达模式的研究,为其在油菜生长发育中的作用奠定基础。
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3. 研究的方法与方案
(1)RNA的提取与反转录cDNA利用实验室所拥有的试剂盒提取其RNA,采用分光光度计法测定总RNA含量并评定其质量,达到反转录要求质量的总RNA用于cDNA第一条链的合成。
(2)引物设计与PCR扩增以cDNA为模板、用特异性基因引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测后测序。
(3)RT-PCR分析根据获得的序列用Primer Premier5.0软件设计RT-PCR引物,通过RT-PCR对该基因在油菜中的时空表达模式进行分析。
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4. 研究创新点
目前国内外尚无油菜BnCXE基因在植物生长发育调节中具体功能的研究报导,本课题通过研究该基因在甘蓝型油菜中该基因的表达模式,从而为后续该基因功能的研究奠定基础。
5. 研究计划与进展
2014年12月:设计引物,克隆基因;2015年1月-2015年2月:材料RNA的提 取,cDNA合成,RT-PCR引物设计;2015年3月-2015年4月:基因表达分析。
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