1. 研究目的与意义
研究内容：目前国际上的重组人角质细胞生长因子-2（rhKGF-2）使用大肠杆菌表达系统生产工艺，因密码子未经优化，载体选择不一定适当，表达量低，都必须经过4-5步层析纯化法才能获得纯度为90%的成品。根据文献报道的人KGF-2天然氨基酸序列及其cDNA序列，在不改变氨基酸序列的条件下，按密码子偏向性进行密码子优化，合成rhKGF-2基因的全序列。选用了大肠杆菌表达载体pET30a( )，将基因克隆于表达载体，并成功地在大肠杆菌中获得高效、稳定表达。rhKGF-2表达产物以可溶形式存在于胞浆。通过一系列参数的调控，确定出高密度发酵的工艺路线。每升培养液可收获湿菌体达25g左右，表达水平达20%以上，每升发酵液中含目的蛋白达800mg左右。经系统化比较不同的纯化策略，最终通过简便的亲和层析、阴离子交换层析的二步纯化方法。整个纯化工艺路线简便，目的蛋白回收率在40％以上，纯化后原液中样品纯度95%以上。通过药理毒理试验结果显示，rhKGF-2能特异性地刺激上皮细胞，对成纤维细胞没有促进作用，因此具有促进创面愈合，减少疤痕形成的作用。
意义：重组人角质细胞生长因子-2（rhKGF-2）是一种对伤口愈合非常有治疗潜力的蛋白质因子，能特异地刺激上皮细胞增殖，促进肉芽组织形成，降解多余胶原，减少疤痕的形成，可用于治疗大面积皮肤损伤和粘膜组织损伤，包括烧烫伤、外伤性创口、慢性创伤、粘膜炎、炎性肠病等，具有显著的社会效益和广阔的市场。
2. 文献综述
重组人角质细胞生长因子-2
治疗浅II烧伤的研究综述
中药资源与开发1101110205125徐艳萍
3. 设计方案和技术路线
质量控制通过活性测定（涉及了方法的建立、验证）、质量检定指标的确定（纯度分析，等电点测定，肽图分析，蛋白含量检测）的方法进行验证
方法建立过程中，考察了不同的影响因素，包括样品浓度范围、稀释方式、测活细胞数、血清浓度、细胞饥饿时间、样品反应时间。
4. 工作计划
2022.1-2022.2查阅大量文献资料，确定选题
2022.2-2022.3撰写开题报告，确定实验方案
2022.3-2022.4实验研究，撰写论文
5. 难点与创新点
本文研制的rhKGF-2产品在国内外均属于领先水平，具有很好的创新性和可行性。其生产工艺简单高效，表达水平达20%以上，目的蛋白回收率在40％以上，纯化后原液纯度95%以上。具有很好的产业化价值。临床前研究表明rhKGF-2安全有效、使用方便。
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