1. 研究目的与意义
蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥分泌物。多于夏、秋二季捕捉蟾蜍，洗净、挤取耳后腺及皮肤腺的白色浆液，加工、干燥。性味辛温，归心经。主要功能为解毒、止痛、开窍醒神。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑吐泻，腹痛神昏，手术麻醉，以及强心、升压、兴奋呼吸、抗肿瘤等。化学成分复杂，主要含蟾蜍甾二烯类，强心甾烯蟾毒类和吲哚碱类。蟾蜍甾二烯类又分为游离型和结合型。其游离型称蟾毒配基，其结合型多为脂溶性的蟾酥毒素类、蟾酥配基类和精氨酸等结合的酯类。这类成分不稳定，在干燥加工或提取过程中易分解为游离型的蟾酥配基类。通过查阅文献，发现相关的研究报道也比较少。本次实验设计希望通过应用硅胶柱层析、固相萃取、制备高效液相色谱等技术来分离纯化结合型的蟾蜍甾二烯类成分。
2. 文献综述
中药活性成分的分离纯化技术概况
摘 要：综述了近年来中药活性成分的分离制备技术的原理和应用进展，包括分子印迹技术、高效制备液相色谱技术、高速逆流色谱技术、超临界流体萃取技术、生物色谱技术。上述分离技术虽然都有各自的优点，但中药化学成分种类繁多，结构十分复杂，往往一种分离技术并不能达到令人满意的结果，所以多种分离技术联用就成为未来的发展方向。
关键词：中药活性成分 分离技术 原理 应用
3. 设计方案和技术路线
一、研究方案
1、蟾酥样品95%乙醇回流提取，再用石油醚、水萃取除去脂溶性大和水溶性大的成分，得二氯甲烷部位。
2、将二氯甲烷部位上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，得到的各组分反复上硅胶柱。再用
固相萃取柱（TE-cys）分离分别得到游离型和结合型蟾蜍甾二烯类成分。
4. 工作计划
2022.022022.03蟾酥样品95%乙醇回流提取，再用石油醚、水萃取除去脂溶性大和水溶性大的成分，得二氯甲烷部位。
2022.032022.04将二氯甲烷部位上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，得到的各组分反复上硅胶柱。再用固相萃取柱（TE-cys,乙腈）分离分别得到游离型和结合型蟾蜍甾二烯类成分。
2022.042022.05分别将游离型和结合型蟾蜍甾二烯类成分进行制备HPLC分析,得到单体化合物，采用NMR、MS等确定化合物结构。
5. 难点与创新点
1、本实验设计基于自制亲水性材料Click TE-Cys，建立了新型反相/ 亲水串联固相萃取富集蟾蜍甾二烯类成分。
2、结合型的蟾蜍甾二烯类成分分离纯化比较困难，相关的文献报道也比较少。本次实验设计希望通过应用硅胶柱层析、固相萃取、制备高效液相色谱等技术来分离纯化结合型的蟾蜍甾二烯类成分。
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