半夏凝集素蛋白的致炎机制研究开题报告

 2023-01-04 11:19:46

1. 研究目的与意义

天南星科有毒中药半夏(Pinellia ternata (Thunb.)Breit.)被历代本草文献记载为有毒,临床误服生品或鲜品均出现强烈的刺激性毒性,表现为口唇刺痛肿胀、咽喉肿痛甚或失音、流涎、呼吸困难甚至窒息死亡,与皮肤接触会出现瘙痒、湿疹,严重的可引起接触性皮炎。

实验室前期研究表明,半夏毒性成分是其中具特殊晶体结构的针晶,被称为毒针晶,毒针晶由草酸钙、蛋白、多糖等物质组成,并发现毒针晶带有的毒蛋白是其中的凝集素蛋白,研究发现凝集素蛋白可通过巨噬细胞介导,促进中性粒细胞迁移聚集,并可刺激巨噬细胞释放大量炎症因子,表明凝集素蛋白具有显著的促炎作用。

半夏的毒性表现为急性炎症,但其诱发炎症的机制未见有深入的研究。

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2. 文献综述

半夏炮制研究进展摘要:天南星科许多植物被记载为有毒,误服或接触此类植物后,会产生强烈的刺激性毒性,临床上通常以制品入药。

天南星科有毒中药炮制前后的成分和药效均有变化,现对其中一味药半夏炮制前后化学成分、毒性作用和药效变化做一综述。

关键词:半夏;炮制;毒性;药理天南星科中药半夏(Pinellia ternata (Thunb.)Breit.)被历代本草文献均记载为有毒,临床误服均出现口唇肿痛、失音、流涎、痉挛、呼吸困难,甚至窒息死亡,与皮肤接触会出现瘙痒、湿疹,严重的可引起接触性皮炎,临床上通常以制品入药。

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3. 设计方案和技术路线

1、 提取、分离、纯化半夏凝集素蛋白2、 以小鼠巨噬细胞体外培养模型研究半夏凝集素蛋白的致炎机制(1) 研究半夏凝集素蛋白对巨噬细胞TLR4受体的作用:采用Western Blotting技术检测半夏凝集素蛋白对巨噬细胞TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6蛋白表达的影响(2) 阻断TLR4受体,进一步确定半夏凝集素蛋白对TLR4受体的作用:采用Western Blotting技术研究阻断受体后,半夏凝集素蛋白对巨噬细胞NF-κB信号通路的影响,以及采用ELISA方法检测阻断受体后半夏凝集素蛋白对巨噬细胞释放炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的影响。

4. 工作计划

2022.02-2022.03 查阅资料,并提取分离纯化半夏凝集素蛋白2022.03-2022.04 研究半夏凝集素蛋白对巨噬细胞TLR4受体表达的影响,以及对下游相关分子蛋白MyD88,IRAK4,TRAF6等的作用。

2022.04-2022.05 阻断TLR4受体,研究半夏凝集素蛋白对下游炎症信号通路NF-κB,以及炎症因子的作用。

整理实验数据,完善论文。

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5. 难点与创新点

1、本课题首次从细胞受体角度,采用体外模型,研究天南星科有毒中药半夏凝集素蛋白的致炎机制,阐明细胞受体在半夏凝集素蛋白产生炎症中发挥的作用,研究思路具有创新性。

2、本课题采用AKTA蛋白纯化技术,Western Blot以及Elisa等技术进行研究,研究方法具有创新性。

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