1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题的研究意义:水稻(Oryza sativa)是人类最主要的粮食之一,在保证国家粮食安全中占有极其重要的地位。
所以增加水稻产量成为全世界水稻育种家的一个主要任务。
而水稻的产量又受到多方面因素的影响。
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2. 研究的基本内容和问题
研究目标:a)通过图位克隆技术,对该叶色基因进行初定位。
b)确定初定为区间后筛选可能的候选基因进行分析。
研究内容:前期实验室利用EMS诱变剂,对水稻kitakki品种进行诱变,发现一株苗期白化,生长后期有条纹的突变体,经过多代自交后获得稳定的突变体植株。
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3. 研究的方法与方案
研究方法: 1、图位克隆技术:利用实验室已有的分子标记和新设计的分子标记,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,确定初定位区间。
2、CRISPR/Cas9和1305-GFP过表达载体的构建:参考公布的日本晴基因组序列设计引物扩增候选基因。
利用实验室的CRISPR/Cas9载体构建平台进行CRISPR/Cas9载体构建,进行该基因的沉默;并利用双酶切的方法,将目标片段连至双元载体pCAMBIA1305.1上,构建1305-GFP过表达载体。
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4. 研究创新点
1)利用图位克隆研究鉴定了一个新的水稻叶色突变体相关的基因。
2)探究该基因和温度的关系,并探究该基因对叶绿体的影响。
5. 研究计划与进展
本计划预计从2017年7月18日开始实施,历时半年左右。
2017.7-2017.11:利用图位克隆技术进行基因的初定位。
2017.10-2017.12:查找候选基因并进行测序验证,以初步确定是否为该基因,并构建CRISPR/Cas9和1305-GFP过表达载体。
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