1. 研究目的与意义
毕业设计内容：
基于Ellmans Assay原理，优化AChE Assay中不同酶源(纯化酶、组织匀浆、血清)浓度、底物浓度、反应时间、反应温度等条件，建立高通量筛选AChE抑制剂的方法。
满足高通量筛选的条件包括但不限于：
2. 文献综述
关于Ellman法检测乙酰胆碱酯酶活性的综述
摘要: 阿尔茨海默病即老年痴呆症是起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。胆碱能缺失学说为治疗阿尔茨海默病提供了方法，且抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性是最成功的方法。所以乙酰胆碱酯酶的活性成为了寻找快速有效的乙酰胆碱酯酶抑制剂治疗老年痴呆的生物标记物(biomarker)。在检测乙酰胆碱酯酶活性的方法中，Ellman法是至今为止最常用的、快速、简便、灵敏的方法。
关键词：阿尔茨海默病；乙酰胆碱酯酶；生物标记物；Ellman法
3. 设计方案和技术路线
使用Ellman法检测检测乙酰胆碱酯酶活性的实验中，氯化硫代乙酰胆碱(Ach-S-Cl)在乙酰胆碱酯酶(AChE)作用下分解，生成硫代胆碱，硫代胆碱与显色液DTNB[5，5'-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)]迅速作用，生成在412nm处有最大特征吸收的黄色物质。反应中DTNB、Ach-S-Cl、AChE的浓度和反应时间皆对反应结果有直接影响。其中DTNB浓度为过量使用，国际通用为1.25mM。所以，本实验旨在优化Ach-S-Cl、AChE的浓度和反应时间，以确保在规定时间内，反应的结果成线性增长。
试剂：DTNB 、Ach-S-Cl 、AChE 、10PBS (Phosphate Buffered Saline)
仪器：96孔板、孔板震荡仪、酶标仪
4. 工作计划
1. 2022.3.2-3.13完成开题报告的写作。 2. 2022.3.14-3.31完成实验方案的初步设计并开始进行实验。 3. 2022.4.1-4.30继续进行课题实验，进一步优化完善实验方案 . 4. 2022.5.1-5.30进行实验及实验数据的分析汇总，并完成论文。 |
5. 难点与创新点
1.创建了方法的数据模型，固化反应条件，为未来进行乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选打下基础，能够高通量地筛选药物，降低成本。
2.采用酶标仪持续检测OD值，省略了终止反应的步骤，从而减少了时间上的误差，使得实验数据更加精确。
3.使用GraphPad Prism6 软件拟合药理学量效关系曲线，减少了人工处理数据的时间，提高了工作效率，确保了数据处理的准确、高效。
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