微核(micronucleus, 简称MCN),也叫卫星核,是真核类生物细胞中的一种异常结构,是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子,如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价,以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。 蚕豆的染色体组型为相当大的染色体,根尖含有较多的分裂相细胞,非常适合显微观察是很好的细胞遗传学研究材料。用蚕豆的根尖细胞来进行X射线的遗传损伤研究,作为一种检测化学品遗传学毒性的方法为人们所知,并广泛采用。微核试验与染色体畸变试验同样具有准确、快速、有明显的剂量一效应关系等特点,操作更简便,也更适于大批量样品的检测。肯定了蚕豆根尖细胞学试.验在环境致突变性检测中的作用,对许多环境致癌物都作了标准化的试验,建立了庞大的数据库,并建议在全世界范围内推广。蚕豆根尖细胞微核实验的测试终点是微核出现的频率。微核是常用的遗传毒理学指标之一,指示染色体或纺锤体的损伤。由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧,而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱呈正比,,因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的程度。蚕豆根尖微核试验的应用价值几乎立即引起了中国学者的注意,1983年陈光荣等利用此方法检测了农药和诱变剂对遗传物质的损伤,1985年发表了国内首篇用蚕豆根尖微核试验直接检测淡水湖泊水质污染的论文。在此之后,关于蚕豆根尖微核测试方法学的探讨及各方面的应用研究迅速在我国发展起来。 蚕豆根尖细胞微核技术是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试终点的植物体细胞检测方法,因具有材料方便,培养简单、技术容易掌握、准确、快速、有明显剂量效应等优点而成为目前研究和应用较多的检测环境污染物质的检测系统。
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2. 研究内容和预期目标 研究内容: 蚕豆根尖微核技术自建立以来,以其简单、快速等特点广泛用于对水源、土壤、大气等环境中化学有毒物质和环境污染物的致突变性检测。微核检测试验是一种快速检测环境因素对遗传物质影响作用的方法,已在环境检测、食品安全性分析等方面得到了广泛应用。当环境因素诱导染色体发生断裂或细胞分裂过程中染色体发生落后现象时,可导致微核形成,且微核的形成数量与环境的致畸效果密切相关。而当环境因素对于遗传物质有保护作用时,可使试验材料本底微核数降低。目前,用于检测外源物质致突变效应的方法较多。蚕豆根尖细胞微核试验具有剂量效应显著,技术简易、方法合理、结果可靠、检测物谱广等特点,在检测遗传毒性方面得到广泛的运用。本文试用蚕豆根尖微核技术对几种杂草的潜在致突变性进行初步研究,为校园环境污染物检测和治理等提供基础性数据。 环境中大量的残留农药可通过食物链经生物富集作用,最终进入人体。农药对人体的危害主要表现为三种形式:急性中毒、慢性危害和“三致”危害。长期接触或食用含有农药的食品,可使农药在体内不断蓄积,对人体健康构成潜在威胁。国际癌症研究机构根据动物实验证明,18种广泛使用的农药具有明显的致癌性,还有16种显示潜在的致癌危险性。环境激素是环境中的一些合成化学物质,它们在生物机体内能够模拟或阻碍天然激素的作用,诱导机体做出错误反应,也称为“外因性内分泌干扰物质”。已知的环境激素有乙烯雌酚、二恶英、多氯联苯、DDT等,多数除草剂、杀虫剂、杀菌剂和防腐剂被怀疑有环境激素的作用,塑料瓶、金属罐、食物、化妆品、玩具、洗涤剂等许多日常用品可能含有环境激素。环境激素能引起多种发育、生长和繁殖方面的问题。此外,环境激素还可能降低机体免疫力,提高癌症发病率,损害神经系统进而使智力和注意力下降、行为失常。近年来,农药和环境激素在环境中的协同污染的几率不断升高,但两者联合的遗传毒理效应研究较少。本文试用蚕豆根尖微核技术对农药和环境激素联合的致突变型进行初步研究。
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3. 研究的方法与步骤 研究方法 采用蚕豆根尖细胞微核监测技术,分别探讨不同环境激素和农药对蚕豆根尖细胞微核率的影响,得出样品的遗传毒性的影响强度。 步骤 实验主要包括微核试验含浸种,催芽,染毒,恢复培养,固定,染色,制片等步骤,观察不同地区土壤样品诱变蚕豆根尖细胞的微核、染色体形态,计算每组处理组的微核率。 材料与方法:
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4. 参考文献 [1] 王映雪. 微核技术在环境检测中的应用概况[J]. 云南财经学院学报, 2004, 15: 55-56. [2] 孔志明. 环境毒理学(第2版)[M]. 2004:196-198. [3] Qian X W. Mutagenic effects of chromiumtrioxide on root tip cells of Vicia faba [J].Zhejiang Univ SCI, 2004, 5(12) : 1570-1576.
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5. 计划与进度安排 (1)2024-2024-2学期第1-3周:接受任务书。查阅资料,确定代表性农药和环境激素样品,准备开题报告,外文论文翻译。 (2)第4周:综合相关文献资料,撰写开题报告完成后在系统中提交,设计微核实验方案并准备预试验。 (3)第5周---第9周:代表性农药和环境激素样品选择和收集;处理蚕豆根尖方法优化。蚕豆微核技术考查不同样品的诱变作用预实验数据整理。优化实验方案,正式实验和必要的重复。比较所得数据,发现所选样品遗传毒性的影响强度。
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