金黄色葡萄球菌多克隆抗体的制备开题报告

 2023-02-19 20:33:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

金黄色葡萄球菌是一种重要的人兽共患病原菌,由其引起的食物中毒在世界各国极为普遍,是一种世界公认的导致人类和动物化脓性疾病的致病因子,也是引起食物性细菌中毒的重要因素[1],能造成严重的社区和医院获得性感染的致病菌[2]。据美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希菌,居第2位,占细菌性食物中毒的33%,加拿大的发生率更高,占细菌性食物中毒的45%[3]。同时,金黄色葡萄球菌作为一种重要的食源性致病菌,是引发奶牛临床型和隐性乳腺炎的主要病原体之一,其流行率在5%~50%之间。奶牛乳房炎不仅使产奶量下降,严重者可使病牛丧失产奶能力,给奶牛业造成严重的经济损失[4],且一旦感染,很难消除,极易产生耐药性[5]。患乳房炎奶牛的乳汁中常含有大量的毒素、病原微生物及治疗后残留的抗生素,食用这种牛奶能引起呕吐、腹泻、发热和过敏等症状,从而严重危及人类健康[6]。金葡菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中均可找到。因此,奶、肉、蛋、鱼及其制品等食品受其污染的机会较多,其也是各级卫生机构重点检测的病原体之一。总而言之,金黄色葡萄球菌对动物和人类的健康造成了重大影响和威胁。

基于此种情况,对金黄色葡萄球菌快速检测技术的研究就显得十分有必要。目前,对金葡菌的检测方法主要包括生化反应快速检测、抗原抗体反应快速检测和分子生物学快速检测[7]。农业部和卫生部采用的金黄色葡萄球菌检测方法为培养法由于这些方法需要特殊仪器设备,加上成本高,检测时间长,限制了其在生活中的广泛应用。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标

本试验旨在通过获得高效价的金黄色葡萄球菌多克隆抗体,为用免疫学方法快速检测金黄色葡萄球菌奠定基础,为基层的金黄色葡萄球菌检测提供方便。

研究内容

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3. 研究的方法与方案

技术路线

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4. 研究创新点

当前,检测金黄色葡萄球菌的传统方法如细菌分离,培养及生化鉴定耗时长、操作繁琐、环境及主观因素影响较大,生化鉴定法和 PCR法等不仅需要昂贵的设备,还需要较高的技术要求和资金投入,制约了在现场快速检测中的应用。而利用多克隆抗体的免疫金标层析技术快速简便,不需要特殊仪器,检测结果为肉眼可观察的红色,是一种非常具有应用前景的免疫诊断技术。而通过免疫动物制备的多克隆抗血清相对于应用杂交瘤技术制备的单克隆抗体具有成本低廉、制备简单的优点,而且能够同时识别多个表位,在实验诊断和免疫技术中具有广泛的应用前景。

5. 研究计划与进展

2019.12-2020.1 资料收集,文献阅读,实验方案设计

2020.2-2020.3 金黄色葡萄球菌培养,动物免疫,抗血清收集

2020.4-2020.5 抗体效价测定,结果分析,论文撰写与答辩

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