拟南芥核输入载体PLANTKAP调控抗病性的机制开题报告

 2023-02-15 10:18:07

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1. 课题意义核质转运过程是真核生物对信号传导进行精密调控的重要途径,亦是植物控制防卫反应信号传导的重要机制。

其中,载体蛋白(karyopherin)、核孔蛋白(nucleoporin)和小G蛋白Ran都在分子跨核运输中肩负重要作用。

水杨酸(SA)信号通路是植物抗病防卫反应中重要的一部分,NPR1作为水杨酸信号通路中重要的调控因子,需要进入细胞核发挥功能。

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标(1) 确定IMP(PlantKap)参与水杨酸信号通路的相关蛋白(2) 筛选水杨酸介导的抗病反应中能与NPR1互作的IMP,明确水杨酸通路中相关调控因子的入核机制2. 研究内容(1) 筛选拟南芥突变位点纯合后代,测定其对病原细菌的反应,确定目标IMP基因。

(2) 拟南芥IMP基因和NPR1基因的克隆,连接载体后经测序确定其序列的正确性,为后续研究IMP蛋白与NPR1的互作提供实验材料。

(3) 构建AD、BD载体,通过酵母双杂交实验进行蛋白互作验证。

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3. 研究的方法与方案

1. 研究方法 (1) 文献阅读法通过网络资源、图书馆网络数据库资源、校图书馆馆藏图书等方式,获得与研究课题相关的文献资料。

通过大量文献的阅读和学习,能了解有关问题的历史和现状,帮助确定研究课题。

同时,吸取国内外专家学者的研究精华,形成了自己研究的理论框架。

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4. 研究创新点

根据前人的研究发现,NPR1一定要入核才能激活植物抗病反应。

目前,有关于NPR1参与水杨酸信号通路的机制研究主要集中在入核以后的转录激活调控上,但对于NPR1是如何进入细胞核暂时不明。

通过筛选出能够帮助NPR1入核的IMP,明确其入核机制,本实验的创新之处便是从核质转运入手进一步探究水杨酸调控植物抗病反应的过程。

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5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2016年6月-9月:查阅相关文献,了解研究背景,掌握基础知识,确定实验方案。

2016年10月-11月:克隆拟南芥IMP和NPR1基因。

2016年12月-2017年1月:构建pGADT7-NPR1/pGBKT7-IMP载体,得重组质粒。

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