1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
禽流感(Avian influenza;AI)是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一种禽类烈性传染病。
其中,低致病性禽流感病毒H9N2亚型致病力较低,在水禽(鸭)中通常不发病。
然而,该病毒可以在水禽尤其是鸭消化道内复制并持续通过粪便排毒,经粪-水-口途径传播给其他水禽,经野生水禽的迁移,再传播给其他陆生家禽和家畜,所以该病毒在中东和远东地区常年存在。
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2. 研究的基本内容和问题
研究的目标建立禽流感病毒H9N2感染小鼠enteroids的模型。
研究内容禽流感病毒H9N2能够感染小鼠enteroids,观察小鼠肠道上皮细胞的病变以及病毒的定位。
拟解决的关键问题小鼠隐窝分离方法刚刚建立,病毒感染实验基础技术需要慢慢摸索。
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3. 研究的方法与方案
研究方法用qPCR的方法验证流感病毒的复制情况,用免疫荧光的方法验证流感病毒的在肠道上皮细胞的感染位置。
用ELISA方法检测细胞因子的表达。
用流式检测小鼠enteroids细胞感染H9N2后,细胞凋亡情况。
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4. 研究创新点
建立小鼠干细胞和小鼠enteroids 体外三维立体培养模型。
在解剖学结构、肠黏膜形态与小鼠真实的黏膜结构更加接近,作为病毒感染模型比较有说服力。
5. 研究计划与进展
建立小鼠肠enteroids 体外培养模型和小鼠肠干细胞的分离培养方法建立流感病毒的感染模型
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