重庆某猪场猪繁殖与呼吸综合症的实验室诊断开题报告

 2023-02-11 01:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猪繁殖与呼吸障碍综合征，又称蓝耳病，分为美洲型和欧洲型，是目前在全球猪群都普遍流行的传染性疾病，传染率高，危害怀孕母猪生殖功能和仔猪呼吸系统，死亡率较高，在我国对经济生产影响较大。

本次实验通过检测重庆某一猪场组织样品及血样，判断是否含有蓝耳病病原以及血清抗体，以诊断得病情况，降低猪场损失。

主要参考文献：1. 苟春天., 马德莹., 王克雄.: 蓝耳病的实验室诊断. 畜牧兽医科技 2011, 10:82~83.2. Eschbaumer M, Li WM, Wernike K, Marshall F, Czub M: Probe-free real-time reverse transcription polymerase chain reaction assays for the detection and typing of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in Canada. Canadian journal of veterinary research = Revue canadienne de recherche veterinaire 2015, 79(3):170-179.3. 曹火仁., 顾晓峰., 朱骏., 沈林辉., 孙文梅., 曹向英.: 荧光定量PCR在高致病性猪蓝耳病检测上的应用. 四川畜牧兽医 2010, 6:21~25.4. 仝利剑., 赵建增., 张社民., 荣. 高, 高英杰., 慕泽鑫., 邢海云., 罗胜军., 涛. 温: 猪蓝耳病病毒抗体双抗原夹心ELISA方法的建立及初步应用. 中国兽医学报 2010, 30(10):1273~1286.5. Sattler T, Wodak E, Schmoll F: Evaluation of the specificity of a commercial ELISA for detection of antibodies against porcine respiratory and reproductive syndrome virus in individual oral fluid of pigs collected in two different ways. BMC veterinary research 2015, 11:70.

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2. 研究的基本内容和问题

一、研究的目标对重庆某猪场从来的样品进行蓝耳病病原分析和血清抗体检测二、研究的内容1、提取该猪场75份血样和5份组织的核酸进行扩增，用荧光PCR及普通PCR分别检测是否含有蓝耳病病原2、将扩增的产物进行基因测序，判定是否为蓝耳病病毒及确定病毒分型3、测定送检血清是否含有蓝耳病特异性抗体三、拟解决的关键问题判定该猪群发病情况及所感染病毒的具体特征

3. 研究的方法与方案

一、研究方法1、荧光PCR、普通PCR检查蓝耳病病原；2、基因测序收集病毒分型相关信息；3、酶联免疫吸附法判定血清抗体是否呈阳性。

二、技术路线请见附件三、实验方案1、按照U6荧光法进行荧光PCR检测2、常规荧光法采用TaKaRa PrimaScript一步法RT-PCR试剂扩增盒3、Elisa 采用IIDEXX公司蓝耳抗体试剂盒

4. 研究创新点

本次实验针对某一猪场进行检测，范围明确，可行性高。

且从抗原和抗体两个方面进行实验室试验，并最终通过基因测序确定病毒分型，流程完整；因此本实验的多重数据可应用于该猪场发病分析，确保结果有效。

5. 研究计划与进展

2015.09~2015.10：收集文献资料、阅读分析、撰写文献综述以及确定实验方案；熟悉相关实验流程；2015.11~2015.12: 正式开始实验，收集实验数据，对比分析；2016.01~2016.02：总结实验经验，写开题报告；2016.03~2016.04: 完成中期报告，以及论文初稿；2016.05~2016.06：完成论文终稿，审核及答辩。

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