1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
水稻是我国主要的粮食作物,种植过程的水量是影响水稻生长、发育的重要因素。
水稻是耗水量最多的作物,据统计, 我国农业用水量占总用水量的70 %以上, 而其中水稻用水量就占65 %~ 70 %。
在众多植物逆境中,水分胁迫是最普遍的一种,干旱将会造成水稻的大量减产。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:1、通过亚细胞定位分析,明确osCUT7的表达部位;2、对CUT7基因进行诱导表达和组织表达;研究内容:1、构建PA7-CUT7载体,将其转入水稻原生质体,确定该基因的亚细胞定位情况。
2、以水稻组成型表达的基因18S rRNA作为内参,用CUT7特异引物进行real-time qPCR分析,检测CUT7的表达情况。
拟解决的关键问题分析osCUT7在干旱、模拟干旱等胁迫条件下的表达情况,明确osCUT7的表达部位。
3. 研究的方法与方案
研究方法利用植物RNA提取,Real-time qPCR技术等生物学实验技术与方法,提取各种胁迫处理条件下水稻粳稻品种中华11三叶期幼苗地上部总RNA,分析osCUT7的表达特性。
利用植物亚细胞定位载体PA7-CUT7,构建载体,并转化水稻原生质体细胞中,进行osCUT7分析的定位。
技术路线:(技术路线见附件)1、植物材料及处理水稻粳稻(Oryza sativa L.sub Japonica)品种韭菜青均由本实验室保存并提供。
4. 研究创新点
特色或创新之处在拟南芥中,对CER1、CER3、CER6、CER8、CER10等的研究较为深入,在水稻中对蜡质基因研究相对较少,本实验通过对CUT7基因的研究,分析其定位及表达特性,为水稻蜡纸基因功能研究提供基础。
5. 研究计划与进展
研究计划:2014.09-2014.10水稻粳稻品种韭菜青三叶期幼苗的培养;2014.10-2014.11各种处理条件下,水稻幼苗地上部总RNA的提取;cDNA第一链的合成;2014.11-2014.12Real-time qPCR分析CUT7在各种处理条件下的表达;构建植物表达载体PA7-CUT7GFP;2014.12-2015.01CUT7在水稻原生质体细胞中亚细胞定位情况的观察;2015.01-2015.02综合分析所有结果,CUT7的表达及定位特性;完成论文写作。
预期进展1、明确osCUT7在各处理下的表达特性2、明确osCUT7在各组织中的表达3、明确osCUT7在水稻原生质体中的定位情况
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